在我们使用多肽的过程中,我们经常会遇到多肽纯度和多肽含量这两个指标,而很多小伙伴可能会有这样的疑问,为什么我们的多肽纯度是95%,但是肽含量却只有80%呢?因为,这个是两个完全不同的概念。
多肽纯度:多肽的纯度是指使用HPLC分析法在214nm(214nm是肽链的吸收波长)处检测到的目标多肽的含量;
多肽含量:是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比;
多肽的纯度是指使用HPLC分析法在214nm(214nm是肽链的吸收波长)处检测到的目标多肽的含量;
除了目标多肽外,HPLC还可以检测到的杂质包括:缺失序列(缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列),截断序列(加保护过程中产生的序列)以及脱保护不完全序列(产生于整个合成过程或最后的裂解过程)等;
但是,HPLC检测不到水和残留的盐份如三氟乙酸盐,醋酸盐等,而在多肽合成过程中,多肽是通过三氟乙酸将肽序从树脂上切割下来的,而且在纯化过程中也会产生少量的TFA,因此,多肽游离的氨基末端和其他侧链如Arg、Lys、His都可生成少量TFA杂质;还有一个就是水分,多肽通常采用冻干法脱水,即使如此,水也会因共价结合的能力不同而不同程度地存在着,因此,通常交付的多肽中,通常都含有TFA盐和微量的水分,而这些都是HPLC检测不出来的,因此,导致了肽含量和肽纯度的不同。